?匯百試劑Percoll細胞分離液的原理及作用


Percoll分離液是一種經過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒,經過高速離心后可形成連續密度梯度,由于Percoll擴散常數低,所形成的梯度十分穩定。Percoll分離液采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數分至數十分鐘內達到滿意的細胞分離結果。此外,Percoll分離液不穿透生物膜,對細胞無毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。Percoll常用于分離和傳話植物原生質體、核、葉綠體、和線粒體。
 
Percoll分離液的配置與使用:
1、不同濃度(密度)Percoll分離液的制備:先用9份Percoll分離液與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
2、不連續密度梯度Percoll層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時,可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
3、裝樣:樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異,一般加樣體積不宜過大,細胞濃度也不可過高,否則會影響細胞的分離和回收。
4、離心:一般采用離心力為400g,時間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時要慢,要平穩。
5、取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經2次洗滌后可供培養或檢測用。
 
Percoll細胞分離液的優點:
Percoll滲透性低、不穿透細胞、密度高、無毒害,是目前較理想的介質。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細胞及其細胞器的分離,純化了包括人血液細胞、骨髓細胞、紅血球細胞、白血球細胞、淋巴細胞、肝細胞等在內的十余種動物細胞。
 
Percoll細胞分離液注意事項:
1、Percoll細胞分離液在儲存及孵育過程中避免將實際保留在強光中。
2、試劑瓶蓋需蓋緊,防止蒸發和污染。
 
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